⑴ 《國產凌凌漆》中阿漆向後扔帽子的動作
~~~~~~~很明顯 是 實驗N次之後 用最成功的一次鏡頭啦
那年代的電影特效一眼就能看出來 所以不可能是特效。
有什麼舍不舍的? 電影都是這么拍出來的
⑵ 幾道題目
問題1:大兒子是紅色的。因為小兒子不知道,所以前三個哥哥肯定有戴紅色的。因為三兒子不知道自己帽子的顏色,肯定前兩位哥哥有戴紅色帽子的,否則他知道自己是戴紅色的。同樣二兒子看到前位哥哥肯定戴的是紅色,否則他知道自己戴的紅帽子。
問題2:分別是AG ,BH ,CE ,DF。因為B參加了三次,H三次都沒參加,所以BH是一個班的,AED參加2次,CFG參加1次,由第一二次知道E和C一組,同樣可分析餘下的。
問題3:丁,
問題4:分別是小張23,小吳25,小徐22。
⑶ RACE實驗的目的是什麼
race
是通過pcr進行cdna末端快速克隆的技術,通過往兩端延伸擴增,獲得cdna完整的3'端或5'端
⑷ 這許多帽子的實驗可以用詞語什麼哪些詞語來概括
1.臨危不亂先人後己助人為樂捨己救人大公無私扶危濟困 2.人心齊
⑸ 生物實驗中的RACE是什麼技術
RACE 是通過PCR進行cDNA末端快速克隆的技術,通過往兩端延伸擴增,獲得cDNA完整的3'端或5'端
⑹ 急求RACE-PCR原理!!!
多是多了點,這樣好有一個全面的認識
第一 RACE的簡介
目前,全長基因的獲得是生物工程及分子生物學研究的一個重點。盡管已經有多種方法可以獲得基因的全長序列,但在很多生物研究中,由於所研究的目的基因豐度較低,從而使得由低豐度mRNA通過轉錄獲得全長cDNA很困難。近年來發展成熟的cDNA末端快速擴增(RACE)技術為從低豐度轉錄快速獲得全長 cDNA提供了一個便捷的途徑。
cDNA 末端快速擴增 (rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術是一種基於mRNA反轉錄和 PCR技術建立起來的、以部分的已知區域序列為起點,擴增基因轉錄本的未知區域,從而獲得mRNA(cDNA)完整序列的方法。簡單的說就是一種從低豐度轉錄本中快速增長cDNA5』和cDNA3』末端,進而獲得獲得全長cDNA簡單而有效的方法,該方法具有快捷、方便、高效等優點,可同時獲得多個轉錄本。因此近年來RACE技術已逐漸取代了經典的cDNA文庫篩選技術,成為克隆全長cDNA序列的常用手段。
第二 RACE的原理
RACE 是採用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5』和3』末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。
3』RACE的原理
一)加入oligo(dT)17和反轉錄酶對mRNA進行反轉錄得到(-)cDNA;
二)以oligo(dT)l7和一個35bp的接頭(dT17-adaptor)為引物,其中在引物的接頭中有一在基因組DNA中罕見的限制酶的酶切位點。這樣就在未知cDNA末端接上了一段特殊的接頭序列。再用一個基因特異性引物(3 amp)與少量第一鏈(-)cDNA退火並延伸,產生互補的第二鏈(+)cDNA。
三)利用3amp和接頭引物進行PCR循環即可擴增得到cDNA雙鏈。擴增的特異性取決於3amp的鹼基只與目的cDNA分子互補.而用接頭引物來取代dT17一adaptor則可阻止長(dT)鹼基引起的錯配。
5』RACE的原理
5』RACE與3』 RACE略有不同。首先,引物多設計了一個用於逆轉錄的基因特異引物GSP-RT;其次,在酶促反應中增加了逆轉錄和加尾步驟,即先用GSP-RT逆轉錄 mRNA獲得第一鏈(-)cDNA後, 用脫氧核糖核酸末端轉移酶和dATP在cDNA5』 端加poly(A)尾,再用錨定引物合成第二鏈(+)cDNA,接下來與3』 RACE過程相同。用接頭引物和位於延伸引物上游的基因特異性引物(5amp)進行PCR擴增。
全長cDNA的獲得
通過RACE方法獲得的雙鏈cDNA可用限制性內切酶酶切和southem 印跡分析並克隆。通常的克隆方法是同時使用一個切點位於接頭序列上的限制性內切酶和一個切點位於擴增區域內的內切酶。由於大多數非特異性擴增的cDNA產物不能被後一個限制性內切酶酶切,因而也就不會被克隆.從而增加了克隆的選擇效率。還可以用在基因特異性引物的 5』端摻人一個限制性內切酶的酶切位點的方法來克隆。最後,從兩個有相互重疊序列的3』和5』RACE產物中獲得全長cDNA。或者通過分析RACE產物的3』和5』端序列,合成相應引物來擴增mRNA的反轉錄產物,從而獲得全長cDNA。
第三 RACE的應用
RACE技術主要是應用於對全長cDNA序列的獲得,但對該技術進行一定的修改後,也可在其它方面顯示出極高的應用價值。
首先,RACE技術可用於cDNA文庫的構建及篩選。Belyavaasky等(1989)用10個骨髓瘤細胞分離的總RNA,通過TdT加同聚尾、(dT)16引物反轉錄,接著用(dC)13和錨定引物擴增的方法建立了一個106克隆的cDNA 文庫。同時,用該方法構建文庫的優點是它們都只需要很少量的實驗材料。建喜等(2001)利用RACE技術從已經構建的cDNA 文庫中成功克隆了家兔精子膜蛋白基因。
其次,應用RACE克隆已知片段的旁側內部序列(neighboring internal sequence)。Fritz等(1991)以及Struck等(1994)分別用該法獲得了3』端和5』端的旁側序列。Zhang (1996)應用LA-PCR方法獲得了特異基因的5』末端非編碼和編碼序列,省去了構建及篩選基因組文庫的麻煩。王東等(2003)利用RT-PCR和 RACE技術從玉米中獲得一個長度為2469bp F2KP蛋白基因的cDNA克隆。此外,RACE技術還可用於克隆同源基因的同源片斷,為尋找同基因提供了一種方法。
除此之外,Whitcomb等設計的隨機引物/錨定PCR能對克隆質粒載體上的靶序列進行定點刪除,採用(N)10錨隨機引物和變性的質粒DNA進行雜交,然後通過T7聚合酶來延伸,這樣單鏈DNA就可被一隨機引物和一基因特異性引物擴增,一端可達到缺失刪除,缺失的片段可達2Kb。Balavoine應用連接介導PCR從一種扁蟲中克隆得到8個分別屬於Hox,msh,NK-1和NK-2的含同源盒的片段,說明RACE可用於克隆同源基因的同源片段,為尋找同源基因提供了一種手段。
RACE技術與生物信息學,例如EST庫相結合,具有快速,高效克隆新基因的特點,為快速釣取基因家族候選新成員提供新思路,如果一個基因是多基因家族的一個成員,用基因特異引物(GSP)可能同時擴增幾個高度同源的Cdna.李紅等利用一條cDNA作為探針,通過BLASTN從GenBank中整合出了7條更長的EST,通過設計引物,利用RACE擴增,得到了7條新基因.相比單純尋找新基因的全長,此種方法的結合充分利用了信息巨大的基因資源庫,得到了更多的信息,獲得新基因速度更快*效果更高,屬一種頗具規模化的方法,很有應用前景。
總之,隨著RACE技術的不斷改進和完善,優化PCR擴增的條件以提高擴增的效率和忠實性,RACE技術必將在基因克隆以及基因家族和基因表達變化等研究中發揮極大的作用。
第四 RACE的優點與局限性
RACE技術相對於其他方法克隆全長cDNA來說具有價廉、簡單和快速等特點。用RACE獲得cDNA克隆只需幾天的時間,而且對豐度很低的起始反應物質,照樣能迅速反饋是否有目的產物生成。因此,可根據不同的RNA制備來修訂反轉錄條件,以滿足全長cDNA的獲得。同時,通過RACE技術獲得5』端調控序列和多聚腺苷化信號序列的信息,有助於選擇引物以用於轉錄模型非常復雜的基因中擴增cDNA的亞群。另外,RACE技術能產生大量獨立克隆,這些克隆可用來證實核苷酸序列,並使得被選擇性剪接或開始用於很少使用的啟動子的特殊轉錄物的分離成為可能。
RACE技術從理論上來說是很簡單的,但是實際操作中會面臨許多技術上的難題。許多研究人員發現,利用RACE來獲得全長基因並非如想像中那般成功,甚至經常會發生錯誤的擴增和克隆結果, 多數情況下,5』端的編碼區經常會由於反轉錄過程的不徹底而丟掉,特別是由於有大的轉錄物或者存在復雜的二級結構的時候,而且連接反應通常是特異性差效率很低,這樣PCR成功進行就不能保證.尤其在長片段擴增時,PCR就顯得不那麼有效.例如幾個Kb片段的產物就需要優化改變擴增條件,而且擴增結果經常出現非特異性擴增條帶,使得選擇目的條帶變得十分困難,而對於豐度較低,長度較長的基因RACE方法困難更大,這是困擾研究人員的一大難題。由於RACE擴增中經常出現由於引物的不匹配而導致的非特異性擴增,有時需要進行幾輪巢式擴增來達到獲得特異性擴增的目的,然而多輪擴增又容易提高PCR反應的錯誤發生率,由於這些原因,利用RACE技術通常不易獲得所希望的結果。
盡管RACE技術在應用中取得了很大的成功.但在實際操作過程仍有不少局限性。一般來說導致失敗的原因主要有二:第一,在逆轉錄、TdT加尾、PCR擴增這三個連接的酶促反應過程中,任何一步的失敗都會導致前功盡棄;第二,即便是上述反應平穩順利.但結果也通常會出現一些非特異性產物或非全長的產物。因此,要保證RACE技術的順利進行,還需從不同方面進行改良優化。
⑺ 測序結果分析,以及RACE引物設計。求助呢
測序結果分析你就得請教數據分析的專家撒,引物設計呢,當然是實驗方面的咯。你得先有實驗,才能在數據分析上面談論問題啊。
⑻ 【求助/交流】用SMART技術得到一個基因的5『 RACE後,是不是就知道該基因的轉錄起始位
一般我們不知道5『端到底有多長,用SMART技術只能說得到了5『端UTR,說明得到完整CDS,但不能確定得到全部5『端UTR,也就不能確定是否是轉錄起始點。用RLM(RNA ligase-mediated)RACE的方法可以確保得到全部5『端UTR,這才能確定起始位點。genetics183(站內聯系TA)Originally posted by won7 at 2010-07-23 16:06:02:
本來smrter就很貴了,不想再買其 ... 按照試劑盒的要求設計引物,通常成功率還是很高的
我記得好像是GC含量60%,Tm值70shaquila(站內聯系TA)我覺得即使是RLM也不能確保,只能說非常靠近,我發現有時候做5RACE時候存在多個長度稍微不同的轉錄本,不算接頭其第一個鹼基都是G,十分古怪,說明都有帽子結構qwertY23(站內聯系TA)你們說的都有道理。race技術現在在市場上,還是比較難做的 。尤其是5」段。我們實驗室的race項目部歡迎各位咨詢交流。試劑盒也是有的。
⑼ 已知一個cDNA3』端的部分序列,請設計實驗流程得到該基因的全長cDNA。
1
先根據部分序列設計一對引物驗證一下序列是否正確(很確信就免),需要的話克隆,有文庫的話雜一下文庫;
2
根據已知序列設計三條巢式引物,進行5』race,拿到5』序列;
3
同時設計巢氏引物,進行3』race拿到3』序列;
4
序列拼接;
5
設計引物擴增全長序列
race的話參考所用試劑盒的說明,不想用試劑盒的話,再和你討論。
⑽ 化學實驗室帶什麼帽子
普通的化學實驗一般不帶帽子,如果是高規格的化學實驗,一般需要佩戴防靜電服/防化學液體/防塵的防化服,這類服裝的帽子和衣服是連在一起的,起到防護工作人員的目的。ps:顏色與製作材料和染料有關,並不是同一規定必須用什麼顏色的。